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土法革兰氏染色之阴性杆菌vs阳性球菌，求鉴定

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xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 01:40 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自： 中国–广东–珠海 电信

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本帖最后由 xiaojian-1213 于 2012-2-19 01:56 编辑

牧夫论坛卧虎藏龙，前几天刚从柳半农大仙那里收了一台日本产的显微镜（见头像）
不得不说柳半农大仙确实是很可靠的商家，赞了先！
今天就来得瑟一下这两天的心得

我所谓土法，就是使用生活中常见的材料的操作方法^ ^
这土法革兰氏染色所用染料为 1、紫药水（随意稀释液）；2、碘酒（未稀释）；3、红药水（未稀释）；4、分析纯酒精
标本是花盆中土壤加水摇晃后的上部澄清液。（个人认为其中乱七八糟的细菌真菌应该不少，呵呵）
制片过程
1、载玻片上3个不同位置滴水数滴
2、土制接种环沾取标本将3个水滴分别弄成浓，中，稀的所谓溶液- -
3、干燥（灯箱上烤干）+火焰固定（喷射打火机）
4、滴加紫药水稀释液覆盖染色30秒
5、纯净水冲洗，甩干
6、滴加碘酒覆盖媒染30秒
7、纯净水冲洗，甩干
8、分析纯酒精（公司装修工地上顺来的- -）脱色25秒
9、纯净水冲洗，甩干
10、滴加红药水覆盖复染45秒
11、纯净水冲洗，烘干

镜检（我觉得叫观察更合适些，毕竟咱是业余的）
20x物镜---40x物镜寻找合适的观察对象
滴香柏油用100x油镜仔细观察，拍照记录（卡片机）

以下是图片，photoshop调整了一下亮度对比度
杆菌长度为2~3微米，哪位大拿认识的话请告诉我一下

g+

g+


g-

g-
-------------------------------------分割线---------------------------
重点：
问题1：
使用100x油镜观察时我没用盖玻片，我想不出这种情况该怎么放置盖玻片- -，求指教
问题2：
这样染色出来的结果是正确的吗？如果有问题请大拿指点一下

谢谢大家





鉴定

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购买望远镜就在牧夫天文商城
 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 01:50 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信

在上图一张
然后清洗油镜，上床睡觉

111

111


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Mr.Lonely♂ 发表于 2012-2-19 09:42 | 显示全部楼层 来自： 中国–河南–郑州 联通
好神奇，微生物啊
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chenbang 发表于 2012-2-19 19:25 | 显示全部楼层 来自： 中国–陕西–西安 电信
1使用油镜是不需要盖玻片的
2.染色有很多，革兰氏只是其中一种，实际操作从标本固定到染色脱色时间还是比较关键的。
3.土壤中富含的是放线菌，土腥味就是放线菌分泌的抗生素引起的。而土壤中的微生物可实验室培养的只有1%左右。

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fanyidian
好恶心啊，土腥味  详情 回复 发表于 2012-2-20 00:16
xiaojian-1213
那油镜上标的160/0.17岂不是忽悠人的？- -  详情 回复 发表于 2012-2-19 22:18
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 22:18 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
chenbang 发表于 2012-2-19 19:25

                               
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1使用油镜是不需要盖玻片的
2.染色有很多，革兰氏只是其中一种，实际操作从标本固定到染色脱色时间还是比较 ...

那油镜上标的160/0.17岂不是忽悠人的？- -

点评

一丈法师
用油镜时可根据需要加或不加盖玻片，因为镜油的折光率和玻璃非常接近。另外楼主的照片中左上半边色差为何那么大？  详情 回复 发表于 2012-2-20 13:17
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siyi 发表于 2012-2-19 22:46 | 显示全部楼层 来自： 中国–北京–北京 联通
革兰氏染色时间是一、一、半、半。即结晶紫染色、碘液、95％酒精、石炭酸复红染色的时间分别是1分钟、1分钟后两种染色半分钟。
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 23:51 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
呃~
我用的是红药水，感觉染色能力不强- -
之前试验几次1：1：1：1的时间比例不能染出不同颜色来（也可能是操作不正确）
下次我再试试- -

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小李医生
自创的？？？呵呵。。。  详情 回复 发表于 2012-2-20 00:07
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小李医生 发表于 2012-2-20 00:07 | 显示全部楼层 来自： 中国–山东–潍坊 联通
xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 23:51

                               
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呃~
我用的是红药水，感觉染色能力不强- -
之前试验几次1：1：1：1的时间比例不能染出不同颜色来（也可能是 ...

自创的？？？呵呵。。。

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xiaojian-1213
条件所限不得已而为之  详情 回复 发表于 2012-2-20 09:10
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fanyidian 发表于 2012-2-20 00:16 | 显示全部楼层 来自： 中国–湖北–黄石 联通
chenbang 发表于 2012-2-19 19:25

                               
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1使用油镜是不需要盖玻片的
2.染色有很多，革兰氏只是其中一种，实际操作从标本固定到染色脱色时间还是比较 ...

好恶心啊，土腥味
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 09:10 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
小李医生 发表于 2012-2-20 00:07

                               
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自创的？？？呵呵。。。

条件所限不得已而为之

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小李医生
呵呵，自我感觉细菌学是一门很复杂的学问啊。什么革兰氏染色法，抗酸染色法，荧光免疫标记法。。。等等，很佩服楼主的勇气！会持续关注你的帖子，有什么能帮上的一定会帮。。。  详情 回复 发表于 2012-2-20 13:12
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小李医生 发表于 2012-2-20 13:12 | 显示全部楼层 来自： 中国–山东–潍坊 联通
xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 09:10

                               
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条件所限不得已而为之

呵呵，自我感觉细菌学是一门很复杂的学问啊。什么革兰氏染色法，抗酸染色法，荧光免疫标记法。。。等等，很佩服楼主的勇气！会持续关注你的帖子，有什么能帮上的一定会帮。。。
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一丈法师 发表于 2012-2-20 13:17 | 显示全部楼层 来自： 中国–河北–石家庄 电信
本帖最后由 一丈法师 于 2012-2-20 13:19 编辑
xiaojian-1213 发表于 2012-2-19 22:18

                               
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那油镜上标的160/0.17岂不是忽悠人的？- -


用油镜时可根据需要加或不加盖玻片，因为镜油的折光率和玻璃非常接近。另外楼主的照片中左上半边色差为何那么大？总体来说照片照的没有细节
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 14:31 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
回法师
色差的问题我也不清楚，用的是国产凤凰最便宜的油镜，可能是这个物镜的问题
另外我觉得我这太机器的载物台有点小偏斜，调焦的时候（自下向上太高载物台）总是从左下角到右上角依次清晰。
如果有调整的方法望赐教~

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一丈法师
如果用不同倍数的物镜观察都有这个现象就是很有可能是载物台不正，如果只有这个油镜出现这种情况的话就可以排除载物台问题，有可能是物镜本身的光轴不正等原因。  详情 回复 发表于 2012-2-20 14:47
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一丈法师 发表于 2012-2-20 14:47 | 显示全部楼层 来自： 中国–河北–石家庄 农业现代化所
xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 14:31

                               
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回法师
色差的问题我也不清楚，用的是国产凤凰最便宜的油镜，可能是这个物镜的问题
另外我觉得我这太机器的 ...

如果用不同倍数的物镜观察都有这个现象就是很有可能是载物台不正，如果只有这个油镜出现这种情况的话就可以排除载物台问题，有可能是物镜本身的光轴不正等原因。

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xiaojian-1213
那可能就是载物台不太正了- - 不过貌似影响不是太大，呵呵 这个可以调整吗？  详情 回复 发表于 2012-2-20 16:18
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 16:18 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
一丈法师 发表于 2012-2-20 14:47

                               
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如果用不同倍数的物镜观察都有这个现象就是很有可能是载物台不正，如果只有这个油镜出现这种情况的话就可 ...

那可能就是载物台不太正了- -
不过貌似影响不是太大，呵呵
这个可以调整吗？
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-20 22:04 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
IMG_1622副本1.jpg
再上一张今天拍的
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一丈法师 发表于 2012-2-21 12:04 | 显示全部楼层 来自： 中国–河北–石家庄 农业现代化所
目镜也是自己配的吗？貌似国产的
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 楼主| xiaojian-1213 发表于 2012-2-21 14:13 | 显示全部楼层 来自： 中国–广东–珠海 电信
法师眼好毒
国产目镜
今天刚到一个奥林巴斯的100x物镜，晚上再上图
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