倾斜照明（13楼加入了100倍物镜的图像）

为什么我们生物实验室的显微镜看不到啊？不给力，我们同学都说欺骗我们感情

不是成品标本, 就是鱼缸里的水滴在载玻片上,盖上盖玻片观察.
标尺是在photoshop里做的，根据物镜和摄影目 ...
dongmin 发表于 2011-7-9 09:34

                               
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    具体怎么测算 和操作能详解一下吗  （我的是1倍摄影目镜 40D相机） 谢谢

具体怎么测算 和操作能详解一下吗  （我的是1倍目镜 40D相机） 谢谢
slt2483 发表于 2011-7-9 10:09

                               
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是这样的：
我用的相机是佳能EOS450D，每个像素5.2微米，所有图像我都先缩小到1/4了，就是图上的每个像素是20.8微米。
我用的100倍物镜，3.3倍摄影目镜，总放大倍数330倍。这样图上每个像素对应63纳米，10微米的标尺需要158个像素（见帖子中100%的原图）。
在photoshop中打开图像，100%放大率下，画一个长158个像素的直线就可以了。

你的情况要根据40D的像素大小和显微镜物镜倍率来计算，关键是显微镜的总放大倍率估算要准确。

是这样的：
我用的相机是佳能EOS450D，每个像素5.2微米，所有图像我都先缩小到1/4了，就是图上的每个像素 ...
dongmin 发表于 2011-7-9 10:21

                               
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    有些明白了 呵呵 感谢

还是买个显微镜专用测微台尺吧，便宜的几十元。用不同倍数的物镜分别拍照，再用photoshop的测量工具测量和换算，并在PS的“分析工具”中设定好不同倍数物镜的测量比例，直接、简单而且靠谱。

最后一个是什么花粉？

还是买个显微镜专用测微台尺吧，便宜的几十元。用不同倍数的物镜分别拍照，再用photoshop的测量工具测量和 ...
一丈法师 发表于 2011-7-9 14:08

                               
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谢谢你的建议。

最后一个是什么花粉？
zystarry 发表于 2011-7-9 18:55

                               
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非常抱歉，不知道是什么植物的花粉。标本上没有标明。

回去试了下100倍的透射暗场，反差比斜入射大很多，立体感也很强。但是分辨率未必比斜入射高，因为手头的暗场聚光镜要求物镜NA<1（好像还没有听说有适用NA>1的物镜的暗场聚光镜）,只能把物镜上的孔径光圈调小了。
而斜入射在特定方向的分辨甚至能超过一般的明场照明。

很有立体感啊，不过个人更喜欢暗视野
killj 发表于 2011-7-10 13:57

                               
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100x物镜，暗视野照明。小DC目镜后拍摄。
和前面同样的藻类，放大倍数无法估算。
   

才发现暗场聚光镜的调中机制失灵了, 油脂腻住了,这好像是某个牌子显微镜的通病了.
上面那张暗场的照明是偏的.
今天把它拆开清洗了一下,修好了.下面这张效果好些. DC在目镜后手持拍的，难免有些抖动。

回复 32# dongmin


    请问你的倾斜照明是用台灯还是什么光源？觉得暗视场拍摄出的边缘不好识别，倾斜照明的拍摄效果很不错。

倾斜照明（Oblique Illumination）是透射显微的一种照明方法。是在聚光器的孔径光圈位置附近加一个阻挡片，挡住部分角度的入射光得到的。如下图



常用的阻挡片，我用的类似（c）


不同透射照明方法的空间频率传递函数（MTF）曲线：
曲线1是普通的透射照明
曲线3是倾斜照明，可以看到高频部分的传递函数明显增加，分辨率是最高的。

这个也没看过。。谢谢法图